Stressmarq SMC-401 抗體技術指南

——高特異性α-Synuclein磷酸化抗體在神經退行性疾病研究中的應用

一、產品核心特性與驗證數據

1.1 抗體基本信息

靶點：α-Synuclein磷酸化位點（Ser129，pS129）

宿主/亞型：小鼠單克隆IgG1

反應物種：人、大鼠、小鼠（經質譜驗證）

1.2 關鍵性能參數

參數 SMC-401 常規(guī)pS129抗體

特異性（WB驗證） 僅識別pS129 部分交叉反應

靈敏度（IHC） 1:1000稀釋可用 通常需1:500

批間差異（n=5） CV<5% CV 10-15%

1.3 應用場景推薦

最佳適用技術：

? 免疫組化（IHC）帕金森病腦切片

? 蛋白質印跡（WB）檢測可溶性α-Synuclein

? 免疫沉淀（IP）分離病理聚集體

二、實驗方案優(yōu)化指南

2.1 樣本前處理關鍵點

組織固定：

4% PFA固定≤24小時（過度固定導致表位掩蔽）

避免酸性脫鈣劑（推薦EDTA脫鈣）

2.2 推薦實驗條件

IHC標準化流程：

復制

1. 抗原修復：檸檬酸鈉緩沖液（pH6.0，95℃ 20min）  

2. 封閉：5%驢血清 + 0.3% Triton X-100（室溫1h）  

3. 一抗孵育：SMC-401 1:1000，4℃過夜  

4. 檢測：HRP二抗+DAB顯色（避免金屬增強劑）  

WB優(yōu)化方案：

凝膠條件：12% Tris-Glycine凝膠

轉膜：0.2μm PVDF膜，100V 60min

封閉：5% BSA/TBST

三、數據解讀與問題排查

3.1 預期結果示例

人腦Lewy小體染色：

陽性信號：棕褐色顆粒狀沉積（40×可見）

背景控制：白質區(qū)域無染色

3.2 異常結果分析

現象 可能原因 解決方案

全片非特異染色 抗原修復過度 縮短修復至10min

無目標條帶（WB） 磷酸酶未被抑制 添加PhosSTOP抑制劑

斑塊染色不完整 組織脫水不充分 延長梯度乙醇脫水時間

四、技術問答（Q&A）

Q1：能否檢測寡聚體形式？

需配合 Native-PAGE（避免SDS解聚）

Q2：與其他Synuclein抗體的區(qū)別？

SMC-401特異性：

? 不識別非磷酸化α-Synuclein

? 與β/γ-Synuclein無交叉

文檔增強建議：

插入 【Lewy小體染色示例圖】 標注典型病理特征

添加 磷酸化驗證方案（Lambda磷酸酶處理對照）

關鍵步驟標注 ??警示（如"避免使用酸性脫鈣液"）